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众所周知,基础科研离不开实验操作,而我们科研小白总是在实验实操中手忙脚乱,不知道如何避免操作失误,也不知道咋解决在实验中遇到疑难杂症,辛辛苦苦重复了好多次的实验,总是折在某个环节……

其实,实验操作并没有想象中那么难,难就难在我们没有真正掌握实验原理,没有把握住实验过程中需要注意的细节。


比如:


在RT-PCR 实验中,RT试剂盒从冰箱拿出,应该充分解冻,瞬离后,混匀,放于冰上,可在冰上加样。试剂可以用数字贴纸编号,避免漏加、错加试剂。


在RNA 抽提实验中,要避免外源酶的污染,外源酶会造成 RNA 的降解,造成 RNA 得率太低,或者彻底失败,而外源酶又是无处不在的。


在Western blot 实验中,配胶时,建议先加水,再加Tris-HCL缓冲液,并且每加一种液体就混匀胶液。加入的TEMED有毒,务必在通风橱中操作,并且加入后立即混匀、灌胶。


实验中需要注意的细节很多,一着不慎满盘皆输。为了帮助大家解决实验过程中面临的重重难题,解螺旋整理了这份《酸谈实验资料包》,包含
40+基础实验、8+热门实验详细教程
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除了详细的实验课件,我们还专门配套了实验笔记和补充资料方便大家更好地学习消化。
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🙋 对科研中常规实验的原理一知半解的同学
🙋 实操中手忙脚乱,不知道如何避免操作失误的同学
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🙋 不知道如何解决实验中的疑难杂症的同学
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40+基础实验全面覆盖  填平实验中遇到的坑
为了帮助大家解决实验过程中面临的重重难题,酸谈实验课程手把手教大家40+基础实验,包括13个表达检测实验、16个表型检测实验、11个机制探索实验每个实验都详细介绍了样品制备、操作要点、数据分析,填平你在实验中遇到的坑……
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13个表达检测实验
1.DNA 甲基化芯片
高通量甲基化芯片 Infinium Human Methylation 450K BeadChip 能够对人全基因组45万个甲基化位点进行检测,覆盖了上一代 27K 甲基化芯片 90%的位点,并同时增加了 CpG 岛以外的 CpG 位点、人类干细胞非 CpG 甲基化位点、正常组织与肿瘤(多种癌症)组织差异甲基化位点、编码区以外的 CpG 岛、miRNA 启动子区域和已通过 GWAS 的疾病相关区域的位点。
2.第二代 DNA 测序技术 
Illumina/Solexa Genome Analyzer 测序的基本原理是边合成边测序。在 Sanger 等测序方法的基础上,通过技术创新,用不同颜色的荧光标记四种不同的 dNTP,当 DNA 聚合酶合成互补链时,每添加一种 dNTP 就会释放出不同的荧光,根据捕捉的荧光信号并经过特定的计算机软件处理,从而获得待测 DNA 的序列信息。
3.基因芯片
基因芯片的测序原理是杂交测序方法,即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法。
4.高通量检测
高通量检测技术可以一次检测多个样品中成千上万个基因的变化,根据高通量技术的不同,可以检测不同的变化,不仅可以检测 DNA、RNA、蛋白的丰度,还可以检测修饰程度,如蛋白磷酸化,DNA 甲基化等等。
5.circRNA 实验
从组织或细胞中提取的 total RNA 中,通常含有多种 RNA,circRNA 实验首先要去除样 本中的核糖体 RNA 和 poly-A RNA 干扰,并用 RNase 酶消化掉线性 RNA,使 circRNA 富集, 这样才能对 circRNA 进行准确分析。
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16个表型检测实验
1.细胞增殖
细胞增殖是生物体的重要生命特征,细胞以分裂的方式进行增殖,我们将为大家详细介绍3D 肿瘤球形成实验、MTT 增殖实验、克隆形成实验、细胞增殖检测实验方法
2.细胞周期检测实验
细胞周期(cell cycle)是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程。
3.细胞凋亡
细胞凋亡是细胞死亡的一种类型,酸谈实验课程包含细胞凋亡检测(TUNEL 法)、AnexinV/7AAD 双染色检测细胞凋亡、线粒体膜电位检测等细胞凋亡实验。
4.血管新生
血管新生是在原有的毛细血管或者微静脉基础上,通过内皮细胞的增殖、分化和迁移,以芽生或非芽生的形式生成新生的血管。
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11个机制探索实验
1.信号转导
信号通路是指生物学信号从细胞外向细胞内传递的过程,通过这种信号的传递对细胞内的生物学过程进行调控。
2.转录调控
随着分子生物学研究方法的不断发展,转录调控的研究也来越火热,酸谈实验课程整理了转录调控方向实验Protocol,涵盖实验原理、实验操作流程、实验操作要点、实验分组设计、数据处理与绘图……
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8+热门实验protocol分享  手把手教你实操
辛辛苦苦做实验发文章,如果因为实验中的某个环节出了问题而功亏一篑,实在太可惜了。
酸谈实验课程为大家分享8+热门实验protocol,包括反转录PCR、PCR引物设计、RNA抽提、RT-PCR、WB、Transwell、免疫组化图像分析、常用信号通路套路等
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反转录PCR
RNA反转录合成cDNA,以cDNA为模板经过变性(让cDNA能够充分打开)、 退火(让引物结合到模板DNA上)和延伸(让DNA聚合酶(Taq酶)开始合成DNA, 让新的DNA链按照模板的碱基顺序延长下去)等过程扩增出很多的目的片段。
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PCR引物设计
引物设计是PCR技术中至关重要的一环,使用不合适的PCR引物容易导致实验失败。
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RNA抽提
RNA抽提有很多种方法,其中TRIzol法是最流行的TRIzol法很快速,且能抽提多种属总RNA,对少量的组织和细胞以及大量的组织和细胞都能有效分离,能抽提不同分子量大小的多种RNA,避免DNA和蛋白的污染,抽提出来的RNA适用于多种实验。
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RT-PCR
全称反转录·聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)是将RNA 的反转录和cDNA 的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。
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Western Blotting
蛋白免疫印迹(Western Blotting)是将电泳分离后的蛋白质从凝胶转移到NC膜或PVDF膜上,然后用特异 性抗体检测某特定蛋白的一种蛋白质检测技术。
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免疫组化图像分析
使用IPP6软件分析单张免疫组化图像、分析多张免疫组化图像、批量分析免疫组化图像,包括校正图片、选定测量项目、选定测量范围、测量、输出数据等详细步骤。
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细胞划痕实验Transwell
Transwell 是一类有通透性的杯状的装置,放入培养板后,分为两室:Transwell 小室内称上室,盛装上层培养液;培养板内称下室,盛装下层培养液。上下层培养液以聚碳酸酯膜(Polycarbonate Membrane)相隔。
细胞种在上室内,因聚碳酸酯膜有通透性,故可研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
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文献场景还原 猫大亲测试剂种草
多读文献可以帮我们了解前沿研究动态和进展,找到立论依据,获得实验设计灵感。
当然,文献阅读也是讲究方法的,猫大老师为大家精选了多篇经典文献,通过还原文献场景,复现材料方法和结果部分写作套路,更有猫大亲测试剂种草,全方位帮你避坑~
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