有救啦!免疫组化及结果分析、miRNA检测,14个表型实验一网打尽
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生物医学是实验科学,需要通过实验来进行分子表达检测、表型检测和机制验证,以实验证明理论正确性。
然而,想要做好基础实验并不是一件容易的事,需要研究人员花费大量时间和精力在实验室,重复实验操作,才能输出实验成果。
解螺旋为大家整理出14个基础实验详尽教程!里面不仅包含了实操步骤,带大家从PCR、WB等基础实验原理到基因过表达、RNAi等基因表达实操,从实验试剂推荐到疑难杂症的解析,最后结合文献信息,学习相关实验技能!(划到底部立即领~)
今天给大家带来最全表达检测资料!
超全超好用
目录
部分截图:
1
7个基因表达检测实验
包含7个基因表达检测详尽教程,如rtPCR、PCR引物设计、RNA抽提、RT-qPCR、WB实验、IHC实验、免疫组化图像分析。
每个实验都详细介绍了样品制备、操作要点、数据分析……
RNA抽提有很多种方法,其中TRIzol法是最流行的。
以cDNA为模板进行PCR,在PCR扩增过程中,通过收集荧光信号,对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期,模板的Ct 值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以可以定量。
蛋白免疫印迹(Western Blotting)是将电泳分离后的蛋白质从凝胶转移到NC膜或PVDF膜上,然后用特异 性抗体检测某特定蛋白的一种蛋白质检测技术。
......
2
7个基因表达操作实验
基因过表达操作流程为构建基因过表达载体——转染——检测过表达效果。
构建融合基因克隆的重点在引物设计,而引物设计要点在——不能移码!不能中间就终止!
长片段/突变基因克隆的重点在引物设计和 PCR。
RNAi 技术的重点在 siRNA 设计,siRNA 设计优先使用文献中或预设计siRNA库中已经验证过的siRNA靶点,实验时同时使用多个有效靶点以排除脱靶效应,既可以直接使用siRNA片段,也可以使用shRNA来进行RNA干扰。
microRNA(miRNA)是一类长度在 22nt 左右的小 RNA 分子,它并不编码 蛋白质,因此 miRNA 与 siRNA 和 circRNA 等小 RNA 分子一样,也是一种非编 码 RNA。
在做qPCR的过程中,常常会出现各种问题,让初学者一筹莫展,要debug,首先要明白bug是怎么出现的,才能对症下药。
PI法是经典的周期检测方法,PI为插入性核酸荧光染料,能选择性地嵌入 DNA双链螺旋的碱基之间与之结合,其结合的量与DNA的含量成正比例关系,用流式细胞仪进行分析,就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态,从而计算出各个期的百分含量。
......
3
读文献学实验
身边很多小伙伴刚开始读实验类文献的时候都是这样的:
1.读标题:这什么鬼,看不懂
2.读概述:emmm我好像大概应该明白了
3.拉到下面,扫了一眼:WOC怎么这么多图!这都是什么鬼?这个&*(…%是什么?这个#¥%@^又是什么?
4.还是其他文章更适合我
不知道屏幕前的你,是不是也是这样呢?
解螺旋精选了几篇文献,教大家如何通过阅读Results标题获取“故事大纲” ,快速了解文献中所用的实验方法。帮助大家完善和调整实验设计,通过实验过程进一步理解和领悟文献中的相关细节。
......
以上
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内容较多,整理不易
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